基因擴(kuò)增PCR是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點,因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。
基因擴(kuò)增PCR的試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū):
下述操作在該區(qū)進(jìn)行:貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。
貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過產(chǎn)物分析區(qū)。在打開含有反應(yīng)混合液的離心管或試管前,應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后,應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆?,避免由于?jīng)常打開反應(yīng)管吸液而造成污染。
含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。為避免因單次反應(yīng)取液而頻繁的凍融主貯存試劑,應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實驗室內(nèi)一次測定所需的擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)來決定。
主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預(yù)試驗來檢查,評價結(jié)果須有書面報告。對于"熱啟動"技術(shù),聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。
在整個本區(qū)的實驗操作過程中,操作者須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施。 嚴(yán)禁用嘴吸取液體,加樣器和吸頭等須經(jīng)高壓處理。
工作結(jié)束后須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵,因此可使用可移動紫外燈,在工作完成后調(diào)至實驗臺上60~90cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百bp,對紫外線損傷不敏感,因此基因擴(kuò)增PCR片段須延長照射時間,是照射過夜。實驗室及其設(shè)備的使用須有日常記錄。
