3.劇烈渦旋震蕩10min。
（此步驟可選用研磨儀，頻率：6.5 m/sec ，處理時(shí)間：30S，10個(gè)循環(huán)）
4.14000 rpm離心5 min，轉(zhuǎn)移上清400 μl到新的1.5 ml的離心管中。
（注意：離心后上清表面可能出現(xiàn)一層雜質(zhì)，避免吸取這些雜質(zhì)，因?yàn)檫@些雜質(zhì)會(huì)影響下游的擴(kuò)增
5.加入250 μl S3-Cleanup Buffer，立即徹底混勻。
6.14000 rpm離心2 min，轉(zhuǎn)移全部上清液（約500 μl）到 預(yù)分裝板的孔1、7中。
打開核酸自動(dòng)提取儀，選擇編輯程序并命名“environmental samples”，按照下表進(jìn)行編輯。
7. 插入磁棒套，運(yùn)行編輯好的程序，25min左右程序結(jié)束，轉(zhuǎn)移洗脫孔6、12中的DNA至新的離心管-20℃保存或直接進(jìn)入q-PCR 檢測。
q-PCR檢測
1、非洲豬瘟擴(kuò)增反應(yīng)液的配制
取出PCR反應(yīng)液，室溫融化后，取相應(yīng)份數(shù)(反應(yīng)液20μl/T、Taq 酶0.2μl/T)混勻，然后向各PCR反應(yīng)管按20μl分裝;再分別加入 5μl抽提好的DNA模板或陰/陽性對(duì)照，蓋好管蓋;將反應(yīng)管置于 全自動(dòng)熒光PCR檢測儀中，參照儀器操作說明設(shè)定陰/陽性對(duì)照、 待檢樣本參數(shù)進(jìn)行PCR反應(yīng)，記錄好樣本擺放順序。反應(yīng)體系如下表:
2、 Q-PCR儀的設(shè)置反應(yīng)程序設(shè)定
第一步: 94 °C15分鐘;第二步:95 °C10 秒，55 °C 35 秒，45 個(gè)循環(huán); 熒光素設(shè)定為FAM在反應(yīng)程序的第二步55°C末讀取熒光值。
陰陽性判斷：
超寬線性范圍，擴(kuò)增檢測單拷貝，超高靈敏度