當(dāng)我們獲得了Micro Drop超微量分光光度計(jì)檢測(cè)結(jié)果后，對(duì)光譜的正確分析至關(guān)重要。
1. A260nm——核酸更高吸收峰的吸收波長(zhǎng)。
2. A280nm——蛋白更高吸收峰的吸收波長(zhǎng)。
3. A230nm——是碳水化合物更高吸收峰的吸收波長(zhǎng)。
4. A340nm——是基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)，為檢測(cè)溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應(yīng)該接近0.0。如果不是，表明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A340一般是0。
● A230產(chǎn)生負(fù)值主要是由于在很低 DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。在下一個(gè)測(cè)定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負(fù)值會(huì)被校正。
● A260/A280比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純 RNA的A260/A280比值為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)的污染，需要純化樣品。
● A260/A230比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估：純 DNA和RNA的A260/A230比值為 1.8 – 2.2。若比值小于1.8表明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機(jī)溶劑污染，需要純化樣品。當(dāng) 260/230<1 時(shí)，通常只有兩種情況。一是胍鹽污染，二是蛋白污染。
● 苯酚/ Trizol萃取——?dú)埩粼噭┪廴究梢酝ㄟ^220至240nm之間的異常光譜以及260至280nm區(qū)域的偏移來表示。加氯仿離心后取上清的時(shí)候千萬(wàn)不要貪多，那樣就很容易被蛋白污染。
● 純化柱提取——?dú)埩綦铱赡苡兄?30nm附近的峰值和從230nm到240nm的波谷偏移。
● 磁珠法提取——?dú)堄嘀榭赡軙?huì)導(dǎo)致光散射，并導(dǎo)致異常光譜。
1. A260/A280、A260/A230比值受溶液酸堿度及離子強(qiáng)度的影響，如酸溶液會(huì)使A260/A280比值降低，低離子強(qiáng)度和低 pH 溶液會(huì)增加 280 nm 處的光吸收值。因此必須確保空白檢測(cè)和溶解樣品所用Buffer的離子濃度和pH值一致。
2. 濃度接近2 ng/μl濃度的樣品可能會(huì)導(dǎo)致不可靠的260/280和/或260/230的比值。
3. 樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在會(huì)干擾測(cè)試效果。樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計(jì)的測(cè)試范圍）。
4. 樣品混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；混合液不能存在氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈。樣品混合不均勻會(huì)直接導(dǎo)致檢測(cè)不確定，重復(fù)性低。
5. 樣品檢測(cè)上樣量不能太少，必須能夠保證能后連接上下兩根光纖形成光柱，從而使得檢測(cè)正常進(jìn)行。
6. 樣品臺(tái)清潔，在檢測(cè)前，檢測(cè)后以及連續(xù)使用儀器30分鐘后均需要對(duì)上下接觸樣品的部位用雙蒸水或純水擦拭。
7. 切忌不可用噴壺在樣品臺(tái)上噴射，以防液體液體進(jìn)入儀器內(nèi)部造成損壞。
8. 切忌不可用洗滌劑或異丙醇清潔基座。
9. 儀器放置位置應(yīng)當(dāng)遠(yuǎn)離通風(fēng)口，以免液滴蒸發(fā)太快導(dǎo)致濃度讀數(shù)偏大。