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技術(shù)文章

基因擴(kuò)增PCR對(duì)污染的預(yù)防與控制分為五個(gè)部分

更新日期:2020年5月8日 大字 小字
  基因擴(kuò)增PCR實(shí)驗(yàn)室分為三個(gè)區(qū),從右到左依次是試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),分區(qū)合理,防護(hù)嚴(yán)密。作為基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,能夠?qū)颊卟∏檫M(jìn)行科學(xué)、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)掌控。

  基因擴(kuò)增PCR對(duì)污染的預(yù)防與控制分為五個(gè)部分:
  PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實(shí)驗(yàn)就需要停止,直到找到污染源為止,而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果需作廢,需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣,浪費(fèi)人力物力。因此要避免污染,首先應(yīng)是預(yù)防,而不是排除。
  1.工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分
 ?。?)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理;
 ?。?)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。

  2.合理的系統(tǒng)設(shè)置
  (1)合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置,盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);
  (2)嚴(yán)格的氣流壓力控制,保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。

  3.規(guī)范的操作
 ?。?)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員需要進(jìn)行上崗培訓(xùn),經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作;
 ?。?)在實(shí)驗(yàn)操作過程中,操作者要戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施;
 ?。?)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后,要立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對(duì)表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對(duì)一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。

  4.嚴(yán)格的管理
 ?。?)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門;
 ?。?)在各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色),當(dāng)工作人員離開時(shí)不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;
  (3)盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。
 ?。?)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒,要經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等;
 ?。?)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

  5.完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施
  完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、加樣器等。
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