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技術(shù)文章

超微量分光光度計(jì)如何測(cè)定核酸濃度

更新日期:2018年1月22日 大字 小字
  Micro Drop超微量分光光度計(jì)買到手要如何使用呢?如何用來測(cè)定核酸濃度呢?

超微量分光光度計(jì)如何測(cè)定核酸濃度


  1、首先,Micro Drop 超微量分光光度計(jì)樣品保留系統(tǒng)上下部的光學(xué)表面清潔干凈的去離子水的2至3uL,吹打至較低的光學(xué)表面。
  2、接著關(guān)閉杠桿臂,要確保上層基座與去離子水相接觸。然后抬起杠桿臂和一個(gè)清潔、無塵、干燥的實(shí)驗(yàn)室擦拭光學(xué)表面擦去。
  3、打開Micro Drop軟件,然后選擇相應(yīng)的核酸程序,接著使用一個(gè)小批量的校準(zhǔn)移液器緩沖液配藥到比較低的光學(xué)表面,用來執(zhí)行一個(gè)空白的測(cè)量。
  4、等到空白測(cè)量完成后,將兩個(gè)光學(xué)表面與一個(gè)清潔、干燥、無塵的實(shí)驗(yàn)室擦拭干凈。
  5、接著選擇適當(dāng)?shù)某?shù)要測(cè)量的樣品。
  6、免除至較低的光學(xué)基座1uL的核酸樣品,并且關(guān)閉力臂。由于測(cè)量的物體是獨(dú)立的體積,所以樣品只需要彌合兩者之間的光學(xué)表面為測(cè)量的差距。
  7、在App中選擇“測(cè)量”。App內(nèi)會(huì)自動(dòng)幫你算出核酸濃度和純度比例。
  8、一個(gè)典型的核酸樣本,將有一個(gè)非常有特點(diǎn)的姿態(tài)展現(xiàn)在你眼前。
  9、與特定的核酸分離技術(shù)相關(guān)的常見污染物的來源包括苯酚/Trizol法和列提取。在苯酚/Trizol法提取的情況下,殘留試劑的污染可能是由220至240nm之間的異常光譜,以及在260?280nm區(qū)域的變化。相反,從列提取的殘留胍可能導(dǎo)致附近230納米的高峰期,在從230納米到約240納米的槽的轉(zhuǎn)變。
  10、為了準(zhǔn)確地評(píng)估樣品的質(zhì)量,260/280或二百三分之二百六十○比率應(yīng)在與整體的光譜質(zhì)量結(jié)合分析。純核酸通常產(chǎn)量的1.8?260/280的比例和DNA和RNA的2.0?260/280的比例,分別。這個(gè)比率是依賴于用于空白和樣品測(cè)量的緩沖pH值和離子強(qiáng)度。酸性溶液中會(huì)根據(jù)代表0.2-0.3的比例,而一個(gè)基本的解決方案將超過代表比例由0.2-0.3。顯著不同純度率可能表明存在蛋白質(zhì),酚或其他污染物,達(dá)到或接近280nm處的強(qiáng)烈吸收。二百三十零分之二百六十零純度比一個(gè)“純”核酸一般在1.8-2.2范圍內(nèi)的值的第二項(xiàng)措施是DNA的純度。純度的比例明顯低于預(yù)期值低可能表明所使用的隔離技術(shù),可能需要進(jìn)一步優(yōu)化。
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